【目的】比较不同剂量龙眼果肉醇提物和水提物对东莨菪碱所致记忆获得性障碍小鼠学习记忆功能的影响，初步解释龙眼果肉改善学习记忆的作用机制。

【方法】分析龙眼果肉醇提物和水提物中主要活性物质含量。将无特定病原体（SPF 级）雄性昆明小鼠随机分为空白组、模型组、龙眼果肉醇提物低剂量组/高剂量组（150 mg·kg-1/300mg·kg-1）、龙眼果肉水提物低剂量组/高剂量组（150 mg·kg-1/300 mg·kg-1），共 6 组，连续灌胃 28 d 后，空白组腹腔注射等量生理盐水，各试验组腹腔注射东莨菪碱造模，0.5 h 后，以潜伏期和穿梭次数为考察指标，采用避暗试验进行行为学测试，作为习得成绩；24 h 后再次进行避暗试验，对小鼠进行记忆保持测试，测试结束后摘眼球取血，脱颈致死，取脑组织进行生化指标检测。测定脑组织的胆碱类（乙酰胆碱转移酶 choline acetyltransferase，ChAT 和乙酰胆碱酯酶 acetylcholinesterase，AChE 活力）及抗氧化相关指标（超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力及丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量），血清中抗氧化相关指标（SOD、GSH-Px 活力及 MDA 含量）。通过综合比较各组间行为学试验指标、脑组织、血清生化指标，判断龙眼果肉改善学习记忆功能的作用效果及作用机制。

【结果】分析龙眼果肉提取物成分发现，龙眼果肉水提物主要为多糖及蛋白质，醇提物除含有糖类外，还含有较丰富的酚类、黄酮类和磷脂物质，其中，醇提物中总酚、总黄酮、总磷脂含量显著高于水提物的（P＜0.05）。行为学试验表明，模型组小鼠在避暗试验中 5 min 内穿梭次数为 2.89 次，是正常小鼠的 6.09 倍，高剂量龙眼果肉醇提物和水提物组小鼠穿梭次数分别为 0.75 次和 0.56 次，与正常组无显著差异；痴呆小鼠在避暗试验中的潜伏期仅为正常组的 0.43 倍,与模型组相比，各剂量龙眼果肉醇提物和水提物均能显著增加痴呆小鼠在避暗试验中的潜伏期（P＜0.05），且存在一定剂量效应关系，其中龙眼果肉醇提物和水提物高剂量组小鼠的避暗潜伏期分别为 289.18 s、290.80 s，与正常组相比无显著差异（P＞0.05）。生化指标方面，与模型组相比，各剂量龙眼果肉醇提物和水提物均能显著增加痴呆小鼠脑组织中 ChAT 活力，显著降低 AChE 活力（P＜0.05），且存在一定的剂量效应关系。相同剂量时，龙眼果肉水提物效果优于醇提物，其中龙眼果肉醇提物高剂量组，龙眼果肉水提物低、高剂量组小鼠脑组织中 ChAT 活力基本恢复正常水平；在抗氧化水平方面，与模型组相比，龙眼果肉醇提物高剂量组显著增加痴呆小鼠脑组织和血清中SOD、GSH-Px 活力，显著降低 MDA 含量（P＜0.05），基本达到正常水平，效果优于同等剂量的龙眼果肉水提物。

【结论】龙眼果肉水提物和醇提物均可改善东莨菪碱诱导记忆获得性障碍小鼠的学习记忆功能，但二者的作用机制可能存在差异，龙眼果肉水提物主要通过调节胆碱能神经系统改善学习记忆功能，其主要作用的物质基础可能为多糖或糖蛋白；醇提物则主要通过提高机体抗氧化活力改善学习记忆功能，其主要作用物质可能为多酚、黄酮、磷脂等。

关键词：龙眼果肉；东莨菪碱；学习记忆功能；乙酰胆碱转移酶; 抗氧化

1.1 材料与供试动物

1.1.1 材料、药品与试剂 龙眼果干（含水量为12.40%），由广东省农业科学院果树研究所提供，品种为‘储良’；氢溴酸东莨菪碱注射液（scopolaminehydrobromide injection）购于徐州莱恩药业有限公司产品；丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、乙酰胆碱转移酶（choline acetyltransferase，ChAT）、乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）和总蛋白质（totalprotein，TP）试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。没食子酸、原儿茶酸、绿原酸、儿茶素、表儿茶素、香草酸、芦丁、鞣花酸、阿魏酸、异阿魏酸、水杨酸、香豆酸及鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖标准品均购自美国 Sigma 公司，甲酸、乙酸、乙腈为色谱纯试剂，购于美国 Fisher 公司。95%乙醇（分析纯）购于天津市大茂化学试剂厂，其余试剂均为分析纯。

1.1.2 实验动物 SPF 级雄性 KM 小鼠，体重 20—25 g，由南方医科大学实验动物中心提供。实验动物许可证号：SCXK（粤）2011-0015。饲养环境：室温（23±2）℃，相对湿度 50%—60%，12/12 h 明暗交替，自由饮食、摄水。小鼠于试验前 7 d 置于实验室适应环境。

1.2 主要仪器

XR-XB110避暗系统（上海尊龙凯时人生就是博信息科技有限公司），SB-5200TD 超声仪（宁波新芝生物科技股份有限公司），FDU-2110 真空冷冻干燥机（东京理化器械株式会社），EYELA CA-2600 旋转蒸发仪（东京理化器械株式会社），UV1800 型紫外可见分光光度计（日本岛津有限公司），多功能荧光分析仪 FluoroskanAscent FL（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），HZQQX 型全温振荡器（哈尔滨东联电子开发有限公司），冷冻离心机（美国 Thermo Electron 公司），DS-1高速组织捣碎机（上海标本模型厂）、AgilentTechnologies 1260 Series、6890N-5975B GC-MS （美国 Agilent 公司）。

1.3 龙眼果肉提取物的制备

1.3.1 龙眼果肉醇提物的制备 取一定量的龙眼干果肉，按 1﹕4（m/v）加入 95%乙醇打浆，室温浸泡1 h，超声提取 30 min，如此反复 2 次，离心（4 000r/min，10 min）收集上清液，滤渣重复提取 1 次，合并上清液。55℃减压浓缩至无乙醇蒸出，此浓缩浸膏即为龙眼果肉醇提物（含水量为 10.86%）。

1.3.2 龙眼果肉水提物的制备 在 1.3.1 离心后的沉淀物中以 1﹕20（m/v）加入蒸馏水，按 1.3.1 的方法提取，收集上清液。将滤渣用 1﹕5 的蒸馏水复提一次，合并上清液，减压浓缩后加 95%乙醇沉降（终浓度为80%），4℃冷藏过夜，离心收集沉淀物用无水乙醇洗涤 3 次，冷冻干燥得龙眼果肉水提物。

1.5 动物分组及处理

将72 只小鼠随机分成 6 组，每组 12 只，分别为：空白组、模型组、龙眼果肉醇提物低剂量组（150mg·kg-1）、龙眼果肉醇提物高剂量组（300 mg·kg-1）、龙眼果肉水提物低剂量组（150 mg·kg-1）、龙眼果肉水提物高剂量组（300 mg·kg-1）。各剂量以提取物干基计，参照龙眼干果肉每日摄取量（9—15 g）基于人-动物剂量转换公式得到，并参考文献做一

定调整。各组均按10 mL·kg-1·b.w.-1灌胃给药（空白组和模型组灌胃生理盐水），每天一次，连续 28 d。在*后一次给药 1 h 后，除空白组腹腔注射生理盐水外，其他组均腹腔注射东莨菪碱（3 mg·kg-1·b.w.-1）制备小鼠学习记忆障碍模型，并于注射 20 min 后进

行避暗试验。

1.6 避暗试验

方法参考DONG 等进行并做一些改进，该试验分为习得测试（Acquisition trial）和记忆保持测试（Retention trial）两部分。小鼠灌胃第 26 天起，连续 2 d 在同一时间将小鼠放入避暗仪中适应 5 min。第 28 天腹腔注射东莨菪碱20 min 后开始习得测试，将小鼠背对拱门放入明箱后，给暗室不锈钢栅栏通以 0.3 mA 电流持续 5 min，由于小鼠具有趋暗的习性会由明室向暗室探索，小鼠一进入暗室即受电击，其正确反应是回到明室，记录小鼠第 1 次进入暗室的时间即为避暗潜伏期（step-throughlatency），步入潜伏期大于 5 min 者弃去不用,5 min 内小鼠进入暗室的次数即为穿梭次数（shuttle number）,作为习得成绩；24 h 后对小鼠进行记忆保持测试，记录小鼠 5 min 内的潜伏期及进入暗室的次数（即穿梭次数），作为记忆成绩，5 min 内未进入暗室的小鼠其潜伏期按 300 s 计，穿梭次数计 0 次。

1.7 小鼠血浆、脑组织内生化指标检测行为学试验结束后，乙醚麻醉小鼠，摘眼球取血，全血离心后取血清；脱颈椎处死小鼠，迅速于冰上断头取脑，加 9 倍体积（m/V）的冰生理盐水进行匀浆，4℃离心（3 000 r/min，10 min），取上清液，即为 10%组织匀浆。分别按照试剂盒表明书测定脑组织匀浆中ChAT 和 AChE 活力，脑组织匀浆和血清中 SOD、GSH-Px 活力及 MDA 含量，采用考马斯亮兰法测定组织蛋白含量。

1.8 数据统计与分析

用SPSS19.0 软件进行试验数据统计分析，组间差异比较采用单因子方差分析（one way ANOVA），显著性用 LSD 法及 Dunnett’s 检验（P＜0.05），所有数据采用平均数±标准差（x ±sd）表示。